(一)抗原elisa試劑盒DNA變性 ：

DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，形成單鏈無規(guī)則線團(tuán)分子雜交爐，因而發(fā)生性質(zhì)改變(如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等) 。

1、DNA變性的方法：

1)加熱;

2)改變DNA溶液的pH;

3)有機(jī)溶劑(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化因素。

2、增色效應(yīng)：DNA在260nm處有zui大吸收值，這一特征是由于含有堿基的緣故。在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型中堿基藏于內(nèi)側(cè)，變性時(shí)由于雙螺旋解開分子雜交爐，于是堿基外露，260nm紫外吸收值因而增加，這一現(xiàn)象稱為增色效應(yīng)(hyperchromic effect) 。利用DNA變性后波長260nm處紫外吸收的變化可追蹤變性過程。

3、溶解曲線：如果升高溫度使DNA變性，以溫度對(duì)紫外吸收作圖，可得到一條曲線，稱為溶解曲線。

4、融解溫度：通常人們把50%DNA分子發(fā)生變性的溫度稱為變性溫度(即熔解曲線中點(diǎn)對(duì)應(yīng)的溫度)，由于這一現(xiàn)象和結(jié)晶的融解相類似，故又稱融點(diǎn)或融解溫度(melting temperature， Tm)。因此Tm是指消光值上升到zui大消光值一半時(shí)的溫度。

5、影響Tm值的因素：Tm不是一個(gè)固定的數(shù)值，它與很多因素有關(guān)：

1) 部因素：pH、離子強(qiáng)度。隨著溶劑內(nèi)離子強(qiáng)度上升，Tm值也隨著增大。

2) 部因素：DNA的堿基比例、DNA的均一性 ;在相同條件下，DNA內(nèi)G-C配對(duì)含量高，其Tm值也高。

6、DNA中的GC含量與Tm值關(guān)系：

Tm = 69。3+0。41 × % (G+C)

對(duì)于小于20bp的寡核苷酸，Tm=4(G+C)+2(A+T)

實(shí)驗(yàn)表明DNA分子中(G+C)克分子含量百分比的大小與Tm值的高低呈直線關(guān)系。

(二)復(fù)性：變性DNA只要消除變性條件，二條互補(bǔ)鏈還可以重新結(jié)合，恢復(fù)原來的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一過程稱為復(fù)性(renaturation) 。

退火：通常DNA熱變性后，將溫度緩慢冷卻，并維持在比Tm低25～30℃左右時(shí)，變性后的單鏈DNA即可恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)，因此，這一過程又叫做退火。

復(fù)性后的DNA，理化性質(zhì)都能得到恢復(fù)。倘若DNA熱變后快速冷卻，則不能復(fù)性。

抗原elisa試劑盒影響復(fù)性速度的因素：

1、DNA濃度：愈高，復(fù)性速度也愈快。

2、溫度：過高不利于復(fù)性。

3、溶液的離子強(qiáng)度：通常鹽濃度較高時(shí)，復(fù)性速度較快。

4、DNA順序的復(fù)雜性;簡(jiǎn)單的分子復(fù)性很快，如polyd[T]和polyd[A]由于彼此互補(bǔ)識(shí)別很快，故能迅速復(fù)性。但順序較復(fù)雜的DNA分子復(fù)性則較慢。因此通過變性速率的研究，可以了解DNA順序的復(fù)雜性抗原elisa試劑盒。