廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、分子雜交儀定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學(xué)領(lǐng)域中具有廣泛地應(yīng)用,而且在臨床診斷上的應(yīng)用也日趨增多。
原理
分子雜交儀其基本原理就是應(yīng)用核酸分子的變性和復(fù)性的性質(zhì),使來源不同的DNA(或RNA)片段,按堿基互補(bǔ)關(guān)系形成雜交雙鏈分子。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間,也可在RNA與DNA鏈之間形成。
核酸分子雜交是基因診斷的基本的方法之一。它的基本原理是:互補(bǔ)的DNA單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈,即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的,即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行,它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行,也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。因此,當(dāng)用一段已知基因的核酸序列作出探針,與變性后的單鏈基因組DNA接觸時(shí),如果兩者的堿基完全配對,它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈,從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列。由此可見,分子雜交儀進(jìn)行基因檢測有兩個(gè)必要條件,一是必需的特異的DNA探針;二是必需的基因組DNA。當(dāng)兩者都變性呈單鏈狀態(tài)時(shí),就能進(jìn)行分子雜交。
操作步驟
1.接通電源打開開關(guān),進(jìn)行參數(shù)設(shè)定。參數(shù)設(shè)定,接通電源→按"選擇"鍵到相應(yīng)的參數(shù)行→按"設(shè)定"鍵,該行第一位開始閃爍,進(jìn)入修改狀態(tài)→按"置數(shù)"鍵,數(shù)字0~9循環(huán)到達(dá)所需的數(shù)字后按"移位"鍵到下一位數(shù)字修改完后,按"設(shè)定"鍵確認(rèn)。按"選擇"鍵可選擇修改其他數(shù)據(jù)或回到正常顯示狀態(tài)。
2.達(dá)到所設(shè)定的溫度后按"運(yùn)行"鍵試運(yùn)行30min。
3.按"停止"鍵然后將所要雜交的東西放到儀器內(nèi)按"運(yùn)行"鍵開始運(yùn)行。
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