(一)原理

Northern雜交是利用DNA可以與RNA進(jìn)行分子雜交來檢測特異性RNA的技術(shù)原位分子雜交儀，首先將RNA混合物按它們的大小和分子量通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，分離出來的RNA轉(zhuǎn)至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，再與放射性標(biāo)記的探針雜交，通過雜交結(jié)果可以對表達(dá)量進(jìn)行定性或定量。

Northern雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計(jì)其豐度的實(shí)驗(yàn)方法，可以從大量的RNA樣本同時(shí)獲得這些信息。其基本步驟包括：①完整mRNA的分離；②根據(jù)RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進(jìn)行分離；③將RNA轉(zhuǎn)移到固相支持物上，在轉(zhuǎn)移的過程中，要保持RNA在凝膠中的相對分布；④將RNA固定到支持物上；⑤固相RNA與探針分子雜交；⑥除去非特異結(jié)合到固相支持物上的探針分子；⑦對特異結(jié)合的探針分子的圖像進(jìn)行檢測、捕獲和分析。ELISA試劑盒

(二)材料

1．待檢測的RNA及制備好的探針。

2．試劑DEPC、瓊脂糖(電泳級)、MOPS電泳緩沖液(10×和l×)、37％甲醛溶液(pH>4)、甲酰胺、甲醛加樣緩沖液、SSC(10×、20×、l×、0．25×)、10mg／ml溴化乙啶、Northern雜交溶液、N0rthern雜交溶液、O．1％SDSDEPC處理的雙蒸水。

3．儀器及器材60℃水浴箱原位分子雜交儀、平臺(tái)式搖床、硝酸纖維素膜、濾紙、雜交袋、電泳裝置和放射自顯影所需試劑和設(shè)備。

(三)方法

1．凝膠或甲醛凝膠的準(zhǔn)備

(1)配制1．2％瓊脂糖凝膠：將4．2g瓊脂糖加入304．5ml水中(用500ml角燒瓶)，放入微波爐內(nèi)溶化后，置于60℃水浴中(凝膠量應(yīng)根據(jù)所需制備的凝膠板大小來決定，一般是20cm×20cm的凝膠板)。

(2)當(dāng)瓊脂糖凝膠涼至60℃時(shí)，加入35ml10×MOPS電泳緩沖液，并加入10．5ml37％甲醛溶液，充分混勻。

(3)準(zhǔn)備好電泳槽，并將加樣孔成形梳插入，使梳頂端與槽底約有1mm距離，倒入上述甲醛瓊脂糖凝膠溶液，冷卻30～45min，小心抽出梳子，加人1×MOPS電泳緩沖液，淹沒凝膠表面(加樣孔大小約10mm×lmm，以便能加入約60ul樣品)。ELISA試劑盒